ゾウリムシの飼育法 †

はじめに　 †

ゾウリムシは、薄めた麦茶やウーロン茶でも比較的簡単に飼育することができるが、研究の現場では、稲わら培養液やレタスジュース培養液が用いられる。ここでは、稲わら培養液とレタスジュース培養液による飼育方法を記述する。

稲わら培養液による飼育法 †

材料 †

• ゾウリムシ（Paramecium caudatum）
• 稲わら：無農薬のものが望ましい。

器具 †

• 鍋または、ビーカー
• 培養瓶：三角フラスコなど
  　（コーヒーの空きビンなどでも良い。）

手順 †

1. ゾウリムシ培養液の調整法
   1. 稲わら５本程度を約8 cm程度に切る。
   2. 1000 mlの蒸留水が入った鍋に切ったわらを入れる。
   3. 鍋を火にかけ、15分沸騰させる。
   4. 完全に冷ます。
       
2. ゾウリムシの植え継ぎ
   1. 約300 mlの容器に冷ました培養液を200 ml入れる(注１)。
   2. ゾウリムシの懸濁液1-2 ml(注２)を、i の培養液に入れる。
   3. 蓋(注３)をして、直射日光のあたらない室温で培養する（図１)(注４)。
   4. ゾウリムシを維持する目的ならば、１〜３か月に1回の頻度で植え継ぐ。
      実習などで、大量にゾウリムシが必要な場合には、必要な日の2週間前くらいに植え継ぐとよい。
       

      図１．稲わら培養液による飼育

ポイントやトラブルシューティング †

• 注１：ゾウリムシの餌となるバクテリアの繁殖のために、稲わらを入れたまま培養液として使用する。
• 注２：負の走地性のため、水面近くの培養液に、ゾウリムシが集まっているので、この部分をゾウリムシ懸濁液として植え継ぐ。
• 注３：密閉せず、通気性のよい状態を保つため、スポンジや紙で蓋をする
• 注４：増殖最適温度は、26℃といわれているが、維持する目的なら、室温で増殖した後、10℃くらいの低温で維持する。

レタスジュース培養液による飼育法 †

材料 †

• ゾウリムシ（Paramecium caudatum）
• エサ用バクテリア　桿菌　（Klebsiella pneumoniae）
• レタス：無農薬のものが望ましい。
• CaCO3
• グルコース
• アガロース
• イーストエクストラクト

器具 †

• 鍋：レタスをゆでる時に使用。
• ピンセット、箸：レタスをゆでる時に使用。
• 濾紙、キムワイプ®
• ビニール袋
• 乳棒・乳鉢:乾燥レタスを粉末にする時に使用。
• 乾燥剤
• 培養瓶：三角フラスコなど
• 三角フラスコ：寒天培地、ゾウリムシ培地作成時に使用。
• オートクレーブ
• オーブン
• 滅菌シャーレまたは、栓つき滅菌試験管：バクテリア培養用
• 白金耳：バクテリア植え継ぎ用

手順 †

1. 乾燥レタス粉末の調整法
   1. レタスの葉は、変色した部分や硬く白い部分は除き、よく洗う。
   2. 沸騰水で、30〜60秒茹で、すぐに冷水にとり、その後、水気を切る。
   3. 水切りした葉は、濾紙の上に1枚ずつ丁寧に広げ、キムワイプ®等で水分をふき取る。
   4. 濾紙ごと120℃のオーブンに入れ、焦がさないように完全に乾燥させる。(注５)
   5. 乾燥した葉は、乾いたビニール袋に入れ、よくもんで粉にする。さらに、乳棒と乳鉢で細かい均一な粉末する。
   6. 乾燥剤を入れた容器に入れて室温で保存する(図２)(注６)
       

      図２．乾燥レタス粉末　保存瓶と粉末

       
2. レタスジュース培養液の調整法
   1. １ℓのフラスコに700〜800mlの蒸留水と乾燥レタス粉末0.5gを加え、加熱し、5分沸騰させる。
   2. CaCO3少量（耳かき1杯程度）を加え、蒸留水で１ℓにメスアップする。
   3. アルミ箔で蓋をして、オートクレーブ（121℃、15分）で滅菌する(図３右)。
       

      図３．レタス培養液とKlebsiella pneumoniae 培養プレート･白金耳

       
3. 桿菌（Klebsiella pneumoniae ）の培養法
   1. アガロース20g、グルコース0.16g、イーストエクストラクト4g(注７)を800mlの水に溶かし、121℃15分　オートクレーブにかけ、寒天培地を作る。
   2. 滅菌したシャーレや試験管に寒天培地を分注し、固める。試験管を使用する場合は、試験管の高さの半分くらいまで寒天培地を注ぎ、寒天が固まる前に、試験管の口のほうをやや高くして、横に倒し、スラントをつくる。
   3. クリーンベンチ内で、K. pneumoniaeを白金耳で寒天面に塗布し室温で培養する(図３左)(注８，注９)。
       
4. ゾウリムシの植え継ぎ
   1. 餌バクテリアとしてK. pneumoniaeの培養容器にゾウリムシ培養液を少量加え、バクテリアを洗い流すようにして、バクテリア懸濁液を作る。
   2. レタスジュース培養液に、バクテリア懸濁液とゾウリムシを入れる。
   3. 蓋をして、直射日光のあたらない室温で培養する。
   4. ゾウリムシを維持する目的ならば、１〜３か月に1回の頻度で植え継ぐ。実習などで、大量にゾウリムシが必要な場合には、必要な日の2週間前くらいに植え継ぐとよい。

ポイントやトラブルシューティング †

• 注５：オーブンでの乾燥は、場所によって温度ムラがでるため、5〜１０分置きに場所を移動させながら、乾燥状態をチェックする。普通10〜30分くらいで乾燥する。
• 注６：温度差があると湿気を帯びやすいので、室温で保存する。
• 注７：K. pneumoniaeは、最低培地で育つので、グルコースと無機塩類が含まれていればよい。
• 注８：乾燥に気をつけて、室温で培養し、２〜３か月ごとに植え継ぐとよい。
• 注９：K. pneumoniaeを培養した培地は、オートクレーブにかけ滅菌後、廃棄する。

参考文献 †

重中義信　監修　(1988)　原生動物の観察と実験法、共立出版

印刷用PDFマニュアル †

ゾウリムシ飼育法.pdf