* ゾウリムシの飼育法 [#f769a0fd]
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#ref(生物学実験/タイトル画/Tゾウリムシ飼育.jpg,exif,right,wrap,around);
#contents
** はじめに [#b2b53018]
ゾウリムシは、薄めた麦茶やウーロン茶でも比較的簡単に飼育することができるが、研究の現場では、稲わら培養液やレタスジュース培養液が用いられる。ここでは、稲わら培養液とレタスジュース培養液による飼育方法を記述する。
** 稲わら培養液による飼育法 [#va06609a]
***材料 [#h5a6c1c3]
-''ゾウリムシ（'''Paramecium caudatum'''）''
-''稲わら''：無農薬のものが望ましい。
***器具 [#p2efe885]
-''鍋''または、''ビーカー''
-''培養瓶''：三角フラスコなど&br;
（コーヒーの空きビンなどでも良い。）
***手順 [#y57f9e32]
+''ゾウリムシ培養液の調整法''
++稲わら５本程度を約8 cm程度に切る。
++1000 mlの蒸留水が入った鍋に切ったわらを入れる。
++鍋を火にかけ、15分沸騰させる。
++完全に冷ます。
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+''ゾウリムシの植え継ぎ''
++約300 mlの容器に冷ました培養液を200 ml入れる([[注１>#attention1]]&aname(attention1r);)。
++ゾウリムシの懸濁液1-2 ml([[注２>#attention2]]&aname(attention2r);)を、i の培養液に入れる。
++蓋([[注３>#attention3]]&aname(attention3r);)をして、直射日光のあたらない室温で培養する（[[図１>#fig1]])([[注４>#attention4]]&aname(attention4r);)。
++ゾウリムシを維持する目的ならば、１〜３か月に1回の頻度で植え継ぐ。&br;実習などで、大量にゾウリムシが必要な場合には、必要な日の2週間前くらいに植え継ぐとよい。
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|CENTER:&ref(mparamefig1.jpg,,50%);&aname(fig1);|
|CENTER:''図１．稲わら培養液による飼育''|
*** ポイントやトラブルシューティング [#i7eb8100]
- &aname(attention1);[[注１>#attention1r]]：ゾウリムシの餌となるバクテリアの繁殖のために、稲わらを入れたまま培養液として使用する。
- &aname(attention2);[[注２>#attention2r]]：負の走地性のため、水面近くの培養液に、ゾウリムシが集まっているので、この部分をゾウリムシ懸濁液として植え継ぐ。
- &aname(attention3);[[注３>#attention3r]]：密閉せず、通気性のよい状態を保つため、スポンジや紙で蓋をする
- &aname(attention4);[[注４>#attention4r]]：増殖最適温度は、26℃といわれているが、維持する目的なら、室温で増殖した後、10℃くらいの低温で維持する。
**レタスジュース培養液による飼育法 [#n65f5afa]
***材料 [#y70f66c9]
-''ゾウリムシ（'''Paramecium caudatum'''）''
-''エサ用バクテリア 桿菌 （'''Klebsiella pneumoniae'''）''
-''レタス''：無農薬のものが望ましい。
-''CaCO&subsc{3};''
-''グルコース''
-''アガロース''
-''イーストエクストラクト''
***器具 [#zf659972]
-''鍋''：レタスをゆでる時に使用。
-''ピンセット、箸''：レタスをゆでる時に使用。
-''濾紙、キムワイプ®''
-''ビニール袋''
-''乳棒・乳鉢'':乾燥レタスを粉末にする時に使用。
-''乾燥剤''
-''培養瓶''：三角フラスコなど
-''三角フラスコ''：寒天培地、ゾウリムシ培地作成時に使用。
-''オートクレーブ''
-''オーブン''
-''滅菌シャーレ''または、''栓つき滅菌試験管''：バクテリア培養用
-''白金耳''：バクテリア植え継ぎ用
***手順 [#m7039241]
+''乾燥レタス粉末の調整法''
++レタスの葉は、変色した部分や硬く白い部分は除き、よく洗う。
++沸騰水で、30〜60秒茹で、すぐに冷水にとり、その後、水気を切る。
++水切りした葉は、濾紙の上に1枚ずつ丁寧に広げ、キムワイプ®等で水分をふき取る。
++濾紙ごと120℃のオーブンに入れ、焦がさないように完全に乾燥させる。([[注５>#attention5]]&aname(attention5r);)
++乾燥した葉は、乾いたビニール袋に入れ、よくもんで粉にする。さらに、乳棒と乳鉢で細かい均一な粉末する。
++乾燥剤を入れた容器に入れて室温で保存する([[図２>#fig2]])([[注６>#attention6]]&aname(attention6r);)
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|CENTER:&ref(mparemefig21.jpg,,50%);&aname(fig2);|
|CENTER:''図２．乾燥レタス粉末 保存瓶と粉末''|
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+''レタスジュース培養液の調整法''
++１ℓのフラスコに700〜800mlの蒸留水と乾燥レタス粉末0.5gを加え、加熱し、5分沸騰させる。
++CaCO&subsc{3};少量（耳かき1杯程度）を加え、蒸留水で１ℓにメスアップする。
++アルミ箔で蓋をして、オートクレーブ（121℃、15分）で滅菌する([[図３右>#fig3a]])。
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|CENTER:&ref(mparamefig31.jpg,,50%);&aname(fig3a);|CENTER:&ref(mparamefig32.jpg,,50%);&aname(fig3b);|
|>|CENTER:''図３．レタス培養液と'''Klebsiella pneumoniae''' 培養プレート･白金耳''|
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+''桿菌（'''Klebsiella pneumoniae''' ）の培養法''
++アガロース20g、グルコース0.16g、イーストエクストラクト4g([[注７>#attention7]]&aname(attention7r);)を800mlの水に溶かし、121℃15分 オートクレーブにかけ、寒天培地を作る。
++滅菌したシャーレや試験管に寒天培地を分注し、固める。試験管を使用する場合は、試験管の高さの半分くらいまで寒天培地を注ぎ、寒天が固まる前に、試験管の口のほうをやや高くして、横に倒し、スラントをつくる。
++クリーンベンチ内で、'''K. pneumoniae'''を白金耳で寒天面に塗布し室温で培養する([[図３左>#fig3b]])([[注８>#attention8]]&aname(attention8r);，[[注９>#attention9]]&aname(attention9r);)。
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+''ゾウリムシの植え継ぎ''
++餌バクテリアとして'''K. pneumoniae'''の培養容器にゾウリムシ培養液を少量加え、バクテリアを洗い流すようにして、バクテリア懸濁液を作る。
++レタスジュース培養液に、バクテリア懸濁液とゾウリムシを入れる。
++蓋をして、直射日光のあたらない室温で培養する。
++ゾウリムシを維持する目的ならば、１〜３か月に1回の頻度で植え継ぐ。実習などで、大量にゾウリムシが必要な場合には、必要な日の2週間前くらいに植え継ぐとよい。
***ポイントやトラブルシューティング [#ib64aff0]
- &aname(attention5);[[注５>#attention5r]]：オーブンでの乾燥は、場所によって温度ムラがでるため、5〜１０分置きに場所を移動させながら、乾燥状態をチェックする。普通10〜30分くらいで乾燥する。
- &aname(attention6);[[注６>#attention6r]]：温度差があると湿気を帯びやすいので、室温で保存する。
- &aname(attention7);[[注７>#attention7r]]：'''K. pneumoniae'''は、最低培地で育つので、グルコースと無機塩類が含まれていればよい。
- &aname(attention8);[[注８>#attention8r]]：乾燥に気をつけて、室温で培養し、２〜３か月ごとに植え継ぐとよい。
- &aname(attention9);[[注９>#attention9r]]：'''K. pneumoniae'''を培養した培地は、オートクレーブにかけ滅菌後、廃棄する。
**参考文献 [#pa35d66a]
重中義信 監修 (1988) 原生動物の観察と実験法、共立出版
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**PDFマニュアル [#r43a118e]
**印刷用PDFマニュアル [#r43a118e]
#ref(ゾウリムシ飼育法.pdf)
