取り組みゾウリムシの飼育法
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ゾウリムシの繊毛運動―金属イオンの影響, など
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はじめに
ゾウリムシは、薄めた麦茶やウーロン茶でも比較的簡単に飼育することができるが、研究の現場では、稲わら培養液やレタスジュース培養液が用いられる。ここでは、稲わら培養液とレタスジュース培養液による飼育方法を記述する。
稲わら培養液による飼育法
材料
- ゾウリムシ（Paramecium caudatum）
- 稲わら：無農薬のものが望ましい。
器具
- 鍋または、ビーカー
- 培養瓶：三角フラスコなど
（コーヒーの空きビンなどでも良い。）
手順
- ゾウリムシ培養液の調整法
- 稲わら５本程度を約8 cm程度に切る。
- 1000 mlの蒸留水が入った鍋に切ったわらを入れる。
- 鍋を火にかけ、15分沸騰させる。
- 完全に冷ます。
- ゾウリムシの植え継ぎ
- 約300 mlの容器に冷ました培養液を200 ml入れる(注１)。
- ゾウリムシの懸濁液1-2 ml(注２)を、i の培養液に入れる。
- 蓋(注３)をして、直射日光のあたらない室温で培養する（図１)(注４)。
- ゾウリムシを維持する目的ならば、１～３か月に1回の頻度で植え継ぐ。
実習などで、大量にゾウリムシが必要な場合には、必要な日の2週間前くらいに植え継ぐとよい。
図１．稲わら培養液による飼育
ポイントやトラブルシューティング
- 注１：ゾウリムシの餌となるバクテリアの繁殖のために、稲わらを入れたまま培養液として使用する。
- 注２：負の走地性のため、水面近くの培養液に、ゾウリムシが集まっているので、この部分をゾウリムシ懸濁液として植え継ぐ。
- 注３：密閉せず、通気性のよい状態を保つため、スポンジや紙で蓋をする
- 注４：増殖最適温度は、26℃といわれているが、維持する目的なら、室温で増殖した後、10℃くらいの低温で維持する。
レタスジュース培養液による飼育法
材料
- ゾウリムシ（Paramecium caudatum）
- エサ用バクテリア 桿菌 （Klebsiella pneumoniae）
- レタス：無農薬のものが望ましい。
- CaCO3
- グルコース
- アガロース
- イーストエクストラクト
器具
- 鍋：レタスをゆでる時に使用。
- ピンセット、箸：レタスをゆでる時に使用。
- 濾紙、キムワイプ®
- ビニール袋
- 乳棒・乳鉢:乾燥レタスを粉末にする時に使用。
- 乾燥剤
- 培養瓶：三角フラスコなど
- 三角フラスコ：寒天培地、ゾウリムシ培地作成時に使用。
- オートクレーブ
- オーブン
- 滅菌シャーレまたは、栓つき滅菌試験管：バクテリア培養用
- 白金耳：バクテリア植え継ぎ用
手順
1. 乾燥レタス粉末の調整法
- レタスの葉は、変色した部分や硬く白い部分は除き、よく洗う。
- 沸騰水で、30～60秒茹で、すぐに冷水にとり、その後、水気を切る。
- 水切りした葉は、濾紙の上に1枚ずつ丁寧に広げ、キムワイプ®等で水分をふき取る。
- 濾紙ごと120℃のオーブンに入れ、焦がさないように完全に乾燥させる。(注５)
- 乾燥した葉は、乾いたビニール袋に入れ、よくもんで粉にする。さらに、乳棒と乳鉢で細かい均一な粉末する。
- 乾燥剤を入れた容器に入れて室温で保存する(図２)(注６)
図２．乾燥レタス粉末 保存瓶と粉末
2. レタスジュース培養液の調整法
- １ℓのフラスコに700～800mlの蒸留水と乾燥レタス粉末0.5gを加え、加熱し、5分沸騰させる。
- CaCO3少量（耳かき1杯程度）を加え、蒸留水で１ℓにメスアップする。
- アルミ箔で蓋をして、オートクレーブ（121℃、15分）で滅菌する(図３右)。
図３．レタス培養液とKlebsiella pneumoniae 培養プレート･白金耳
3. 桿菌（Klebsiella pneumoniae ）の培養法
- アガロース20g、グルコース0.16g、イーストエクストラクト4g(注７)を800mlの水に溶かし、121℃15分 オートクレーブにかけ、寒天培地を作る。
- 滅菌したシャーレや試験管に寒天培地を分注し、固める。試験管を使用する場合は、試験管の高さの半分くらいまで寒天培地を注ぎ、寒天が固まる前に、試験管の口のほうをやや高くして、横に倒し、スラントをつくる。
- クリーンベンチ内で、K. pneumoniaeを白金耳で寒天面に塗布し室温で培養する(図３左)(注８，注９)。
4. ゾウリムシの植え継ぎ
- 餌バクテリアとしてK. pneumoniaeの培養容器にゾウリムシ培養液を少量加え、バクテリアを洗い流すようにして、バクテリア懸濁液を作る。
- レタスジュース培養液に、バクテリア懸濁液とゾウリムシを入れる。
- 蓋をして、直射日光のあたらない室温で培養する。
- ゾウリムシを維持する目的ならば、１～３か月に1回の頻度で植え継ぐ。実習などで、大量にゾウリムシが必要な場合には、必要な日の2週間前くらいに植え継ぐとよい。
ポイントやトラブルシューティング
- 注５：オーブンでの乾燥は、場所によって温度ムラがでるため、5～１０分置きに場所を移動させながら、乾燥状態をチェックする。普通10～30分くらいで乾燥する。
- 注６：温度差があると湿気を帯びやすいので、室温で保存する。
- 注７：K. pneumoniaeは、最低培地で育つので、グルコースと無機塩類が含まれていればよい。
- 注８：乾燥に気をつけて、室温で培養し、２～３か月ごとに植え継ぐとよい。
- 注９：K. pneumoniaeを培養した培地は、オートクレーブにかけ滅菌後、廃棄する。
参考文献
重中義信 監修 (1988) 原生動物の観察と実験法、共立出版
印刷用PDFマニュアル
- ゾウリムシ飼育法
（295KB）
